24小时服务热线:

138-1211-9616

欧宝体育

咨询热线:

0510-86395391

邮箱:zhongkai-jixie@qq.com

传真号码:0510-86395392

地址:江阴市祝塘镇镇南路65号

方法组织总蛋白的提取称取冻存组织标本 用剪剪

作者:欧宝体育 日期:2019-12-24 12:29 人气:

  方法组织总蛋白的提取称取冻存组织标本 用组织剪剪碎 加入 细胞裂解液含 冰上操作用匀浆机将组织粉碎 低温高速离心机 离心取上清液即为组织总蛋白。 冰箱保存备用。 蛋白浓度测定 改良 标准蛋白的配置采用牛血清白蛋白 作为标准蛋白 配制成一定的浓度 该浓度下 的光吸收度为 并以此为参照效正其浓度 置于

  方法组织总蛋白的提取称取冻存组织标本 用组织剪剪碎 加入 细胞裂解液含 冰上操作用匀浆机将组织粉碎 低温高速离心机 离心取上清液即为组织总蛋白。 冰箱保存备用。 蛋白浓度测定 改良 标准蛋白的配置采用牛血清白蛋白 作为标准蛋白 配制成一定的浓度 该浓度下 的光吸收度为 并以此为参照效正其浓度 置于 保存备用。标准曲线制备 实验表格 徐州医学院硕士学位论文 水浴后上机检测 的光吸收度 含量 值计算斜率 试剂待测样品 蛋白质浓度值计算 蛋白质浓崴嘶 值计算蛋白质质量 根据样品的体积数和所测质量数调整浓度为 的蛋白质 体积差值以匀浆缓冲液补充然后加入 体积的蛋白上样缓冲液 密闭置于沸水中煮沸变性 后置于 保存备用。 聚丙烯酰胺凝胶电泳 在制胶用的两层玻璃板中加入新鲜配置的 分离胶 然后加入 凝胶在室温下聚合。胶凝固后将 倒出 滤纸吸干分离胶表面。然后灌入新鲜配置的 浓缩胶 距夹层顶部 高为止 将梳子插入浓缩胶液体中 室温下聚合 。放入装有 电泳缓冲液的电泳槽中 拔出梳子。 枪头吹打上样孔 使底边清洗。 加样和电泳蛋白样品从 冰箱中取出复温煮沸 。根据前面所测蛋白浓度 每个泳道中加蛋白样品 。为避免电泳的边缘效应凝胶两侧的加样孔加入等体积的废样 蛋白质 同时上样电泳 采用 电泳仪公司 先用 伏电泳 待样品到达浓缩胶时再将压调至 裁制同等大小的滤纸、海绵垫和两张同等大徐州医学院硕士学位论文小的 按照阳极 滤纸— 膜一凝胶一滤纸 阴极 的顺序逐层安装半干转电泳转移装置 注意尽量排除每层之间所有气泡。 电泳结束后 取出凝胶 切除浓缩胶 小心剥下分离胶 并根据 位置确定裁胶位置。分别裁胶两块胶约 调整与滤纸对齐轻轻用玻棒赶去气泡 再依次覆盖滤纸海绵垫 赶去气泡同上方法。合起转移器的夹子。 时间分子量 电流加倍时 则时间 减半 结束后将凝胶进行银染 查看蛋白质是否转移完全 以便调整和优化实验操作。 冰箱中保存。整理并回收电泳液。 封闭将 膜放入封闭液中 置于水平摇床上 室温 封闭 小时。 免疫印记用封闭液配制一抗工作液 。工作浓度为 一抗孵育纤维膜 徐州医学院硕士学位论文夜。清洗 每次用封闭液稀释荧光二抗 稀释度为 室温避光条件下反应 小时 清洗 结果分析采用分析软件系统处理以目的蛋白条带的吸光度容积与 条带吸光度容积的比值作为目的蛋白的相对含量。 统计学处理采用 统计软件 计量资料结果用均数士标准差 表示两组间均数采用 检验 相关性分析采用 方法 作为差异有统计学意义。徐州医学院硕士学位论文结果 流产组及对照组绒毛中 表达在两组绒毛组织中表达 在两组绒毛组织中均有表达 但表达强度不同 流产组中的表达高于对照组 在流产组及对照组绒毛中的平均相对表达量分别为 在两组绒毛中均有表达但两组表达强度不同 在对照组绒毛组织中的表达均强于流产组其中 在对照组和流产组的平均相对表达量分别为 蛋白表达蛋白在两组绒毛组织中表达 蛋白在两组绒毛组织中表达均有表达 但两组表达强度不同 流产组中的表达高于对照组 蛋白在流产组和对照组绒毛中的平均相对表达量分别为 蛋白在两组绒毛中均有表达但两组表达强度不同 蛋白在对照组绒毛组织中的表达均强于流产组其中 在对照组和流产组的平均相对表达量分别为 的相关性经相关性分析发现 蛋白与 之间有明显的负相关性 蛋白与 之间亦存在明显的负相关性 徐州医。徐州医学院硕士学位论文讨论妊娠早期自然流产 是人类生殖中最常见的并发症 发生率占全部自然流产的 。且近年发病率呈上升趋势目前其发病机制尚未完全阐明。正常妊娠维持胎儿在子宫内生长发育直至分娩 这一过程有赖于独特的母 胎界面微环境 同时还需要母一胎界面生物学功能的精密调控 特别是滋养细胞的生长及侵袭能力在正常早期妊娠的维持中至关重要 否则可能导致妊娠失败 从而发生自然流产。母一胎界面是胚胎和母体直接接触的前沿 早孕期母一胎界面的生物学事件可概括为子宫内膜蜕膜化 滋养细胞发育 胎盘形成 母胎之间的复杂对话。滋养细胞来自胚胎 是唯一与母体蜕膜及其免疫活性细胞接触的胚胎细胞 滋养细胞的迁移与侵袭是胚胎着床、胎盘发育 并建立母胎循环的关键步骤。晚期囊胚着床后 位于绒毛内层的细胞滋养细胞分裂、增殖、分化 最终形成生物学特性明显不同的绒毛细胞滋养细胞 及绒毛外细胞滋养细胞 融合为合体滋养细胞覆盖绒毛表面 作为母一胎间物质交换的屏障 并承担胎盘主要内分泌功能 如分泌人绒毛膜促性腺激素 、泌乳素 入侵至蜕膜深部聚集形成孤岛并取代子宫螺旋动脉血管内皮细胞 表达粘附分子 完成血管重铸 与蜕膜及螺旋动脉中的母体免疫细胞直接接触。绒毛外细胞滋养细胞 具有独特的类似于恶性肿瘤细胞的高度增殖和侵袭能力 但它的侵袭又受到严格限制 虽分散在宿主脉管系统 但滋养细胞无限制增殖和恶变却很罕见。滋养细胞增殖与侵袭功能的正常发挥对于囊胚植入、胎盘发育 并建立恰当的母一胎关系至关重要。此功能异常是自然流产、子痫前期、胎儿生长受限 等妊娠相关疾病以及滋养细胞肿瘤的主要原因。滋养细胞侵袭依赖活化的蛋白酶和蛋白酶抑制剂之间的精细调控 使得 徐州医学院硕士学位论文降解和吸收 滋养细胞在其中迁移和游走 才能侵入蜕膜深部与内皮细胞相互作用 成功取代血管内皮细胞。然而 的侵润调节机制仍不明确。目前认为至少有 类蛋白酶参与 重建、滋养细胞的侵入 分别 、丝氨酸蛋白酶 尿激酶型纤维蛋白酶原活化剂 、半胱氨酸蛋白酶。滋养细胞粘附和侵袭蜕膜组织与 的活性相关 而滋养细胞自分泌的 的降解是滋养细胞侵袭的两个关键酶。早期妊娠的胚胎组织与恶性肿瘤的生物学行为十分相似两者的侵润机制有很多共同之处 尤其表现为 的降解和重建 但胚胎绒毛的侵袭性仅限于子宫内膜和肌层的浅 且于妊娠 左右达到高峰 于妊娠中期停止 这种高度可控的侵袭特性 受多种机制的严格调控。目前已证明滋养细胞侵袭过程包括 降解和重铸。滋养细胞侵入子宫蜕膜的过程受滋养细胞自分泌和子宫旁分泌的精确调控 、整合素、胰岛素样生长因子、尿激酶型纤溶酶原激活物 等调控 其中滋养细胞自分泌的 的降解是滋养细胞侵袭的限速步骤。是一类肽链内切酶 目前已发现有 个家族成员 其中明胶酶 明胶酶 明胶酶 是早孕滋养细胞侵袭中的关键酶 它主要降解 胶原及其他 如胶原 、纤维连接蛋白层黏连蛋白及玻连蛋 报道人早孕期内滋养细胞均有 的表达表明在胚胎着床和胎盘形成过程中 周时的滋养细胞表达占优势则在孕 周时的滋养细胞表达占优势‘每 和其组织抑制剂的比例协调维持着 降解和合成的动态平衡 在滋养细胞的侵袭中共同发挥重要的作用。二者相互制约、相互平衡 侵润与抗侵润之间的动态平衡随着妊娠的进展时期不同而处于既满足妊娠生理又不至于超出正常限度的范围。若这种平衡被打破 造成滋养细胞侵蚀过浅或过深 均可引起病理妊娠。前者如自然流产、先兆子痫、子痫、 转染的大鼠成纤维细胞株细胞 表达文库中分离出来的一种新的转移抑制基因 是近年发现的新型 抑制剂。 基因编码 膜锚定糖蛋白 基因在人类多种正常组织中广泛表达 但在许多肿瘤源细胞系中低表达或未测及【 可以在转录后水平调节包括调节 可抑制酶原的分泌 膜锚定和可溶性 还可直接抑制 的催化活性【】。研究表明 当在无内源性 基因表达的肿瘤细胞 恢复表达这些肿瘤细胞的 分泌活化和侵袭转移能力明显被抑制【 】。最近研究还表明 表达高低与肿瘤远处转移及临床转移密切相关 】。然而 在人妊娠中相关研究则较少。 研究发现胎盘组织中活性表达变化与滋养细胞侵润活性呈正相关 】进一步用脂质体介导的的方法将重组到人早孕绒毛外滋养细胞系 结果 过表达可显著减少绒毛外滋养细胞的 活化及侵袭能力 二者相互制约、相互平衡可能在早期滋养细胞侵袭行为中发挥重要作用。本研究直接检测早孕流产绒毛组织 并与正常早孕绒毛组织进行对照 结果发现 在正常早孕的绒毛组织中 所表达的及蛋白的量均明显高于自然流产组 差异具有统计学意义。说明正常早孕的绒毛组织的侵袭力强于自然流产者 对于 的抑制物 的表达量 在正常早孕组中则明显低于自然流产组 表明在自然流产组中绒毛侵袭力相对较弱 而侵袭抑制性因素占优势。我们分析 这种滋养细胞的侵袭力不足造成胚胎与蜕膜组织黏附不牢固 植入子宫内膜过浅 螺旋小动脉不能转化为低阻力血管 导致胎盘局部缺血缺氧 可能与流产的发生相关。在人早孕绒毛外滋养细胞系 中的研究表明 过度表达可显著减少绒毛外滋养细胞的 活化及侵袭能力 两者之间呈负相

  基质金属蛋白酶抑制基因RECK在早期自然流产绒毛组织中的表达及意义组织,帮助,抑制基因,表达,自然流产的,自然流产,绒毛组织中,RECK,自然流产绒

欧宝体育
欧宝体育| 公司简介 | 新闻中心 | 产品中心 | 售后服务 | 营销网络 | 联系我们 |